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导读：
本文献研究背景
本文献研究内容
本文献研究总结
一、研究背景
最近，使用抗PD-1或抗PD-L1抗体抑制活化T细胞上的程序性死亡1（PD-1）和抗原呈递细胞（包括肿瘤细胞）上的PD配体1（PD-L1）之间的相互作用已被证明可以在包括黑色素瘤、膀胱癌和，非小细胞肺癌（NSCLC）。与黑色素瘤和NSCLC不同，BC通常被认为是低突变负荷的低免疫原性。然而，肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）通常存在于乳腺肿瘤周围和/或乳腺肿瘤内，并且是早期BC的预后因素，基于辅助治疗的大型前瞻性临床试验。考虑到TIL代表了肿瘤免疫应答的存在，BC免疫检查点抑制剂（ICIs）似乎是一种新的策略。
本研究的目的如下：①根据TIL水平和PD-L1状态将乳腺肿瘤分为四组，而不考虑亚型；②确定原发性BCs中是否存在抑制性免疫亚群，包括TAM和FOXP3+Tregs，以评估乳腺癌的潜在新免疫治疗靶点。
二、研究内容
Part1TIL在初级BCs中的分布
研究者们检测了73例原发性乳腺肿瘤中TIL的频率，其中12%（9/73）的TIL50%，14%（10/73）的TIL为10%-50%，74%（54/73）的TIL10%。TN肿瘤中TIL的含量明显高于HR+HER2肿瘤（P=0.）。此外，高HG肿瘤的TIL水平显著高于低HG的肿瘤（HG3vs.HG1，P=0.），增殖性较强的肿瘤（Ki-%）的TIL水平明显高于增殖性较差的肿瘤（Ki-67≤20%）（P=0.）。TILs水平与Ki-67指数显著相关（P0.）。这些结果表明TILs的频率与原发性肿瘤的侵袭性特征高度相关。研究者们的结果与先前的发现一致（6,24）。为了进一步分析，研究者们根据TILs的频率（10%的截止值）将肿瘤分为两组（高或低）。
Part2PD-L1在原发性BCs中TCs和ICs的表达
研究者们分析了PD-L1在TCs和ICs中的表达。所有亚型肿瘤中PD-L1阳性率为16.4%（12/73），ICs为30.1%（22/73）。在HR+HER2肿瘤中，TCs和ICs的PD-L1阳性率分别为6.7%（3/45）和15.6%（7/45）。在HR+HER2+肿瘤中，TCs和ICs中PD-L1阳性率分别为0%（0/6）和33.3%（2/6）。在HR-HER2+肿瘤中，TCs和ICs中PD-L1阳性率分别为33.3%（1/3）和66.7%（2/3）。而TN肿瘤中，TCs和ICs中PD-L1阳性率分别为42.1%（8/19）和57.9%（11/19）。PD-L1在ICs中的表达水平往往高于TCs，TN型的PD-L1表达水平高于HR+HER2型，这与之前的报告一致。此外，在TCs和ICs中PD-L1的表达与高HG（Hg3vs.HG1-2）（TC:P=0.；IC:P=0.）、高Ki-67指数（Ki-%）（TC:P=0.；IC:P=0.）和TIL的高频率（TC:P0.；IC:P0.）显著相关。
Part3基于TILs和PD-L1状态的原发性BCs肿瘤分类
根据TILs和PD-L1状态，研究者们将73例原发性BC分为4组。如表二所示，研究者们将ICs中的PD-L1状态视为肿瘤部位的整个PD-L1状态。在所有检查的肿瘤中，21.9%（16/73）的肿瘤被归类为TIL+PD-L1+，65.7%（48/73）的肿瘤被归类为TIL?PD-L1-。TIL+PD-L1+组和TIL-PD-L1+组分别为4.1%（3/73）和8.3%（6/73）。在TIL+PD-L1+组中，HR+HER2-、HR+HER2+、HR-HER+和TN型分别为18.7%（3/16）、0%（0/16）、12.5%（2/16）和68.7%（11/16）。相反，在TIL-PD-L1组中，HR+HER2-、HR+HER2+、HR-HER2+和TN型分别为77.1%（37/48）、6.3%（3/48）、2.0%（1/48）和14.6%（7/48）。相反，82.2%（37/45）的HR+HER2-肿瘤是TIL-PD-L1-，而57.9%（11/19）TN肿瘤是TIL+PD-L1+肿瘤。
Part4乳腺癌组织中淋巴细胞的组成
研究者们通过IHC鉴定肿瘤组织中的淋巴细胞（CD3+、CD8+T细胞、FOXP3+Tregs和CD20+B细胞）和巨噬细胞（CD68+和CD+细胞），以检查局部免疫TME。使用ImageJ软件对染色细胞面积进行计数，并评估每个子集的分布。如图所示，CD3+T细胞（总T细胞）高度聚集（平均6.4%），几乎一半的T细胞被确定为CD8+T细胞（平均3.1%）。某些肿瘤中也有CD20+B细胞积聚（平均2.8%）。由于研究者们通过核染色鉴定了FOXP3+Tregs，因此阳性面积似乎比表面染色评估的其他细胞小（平均0.4）。然而，研究者们通过这种方法观察到一些肿瘤中存在FOXP3+细胞。研究者们根据每个子集的平均值将肿瘤分为“高”或“低”组。在ICs和TCs中PD-L1阴性与CD3+T细胞、CD8+T细胞、CD20+B细胞和FOXP3+Tregs的数量显著相关。
Part5乳腺癌组织中巨噬细胞组成及其与临床病理因素的关系
接下来，研究者们用两种不同的标记物对巨噬细胞进行染色，以阐明BC组织中TAM的特征：CD68（泛巨噬细胞的标志物）和CD（M2型巨噬细胞的标志物）。两种巨噬细胞均存在于肿瘤间质和巢中。与CD68+巨噬细胞（平均3.7%）相比，CD+巨噬细胞在BC组织中占据更大的面积（平均7.1%）（P0.）。这两种类型的巨噬细胞都与高水平的TILs、CD3+T细胞和CD8+T细胞有关，但与CD20+B细胞无关。
Part6TIL+PD-L1+和TIL-PD-L1-肿瘤的抑制亚群
最后，研究者们对按TILs和PD-L1状态分类的四组中的抑制细胞、FOXP3+Tregs和CD+M2型巨噬细胞进行了量化。在TIL+PD-L1+肿瘤中，FOXP3+Tregs和高CD+巨噬细胞的肿瘤频率分别为62.5%（10/16）和87.5%（14/16）。相比之下，在TIL-PD-L1肿瘤中，高FOXP3+Tregs和高CD+巨噬细胞的肿瘤频率分别为27.1%（13/48）和20.8%（10/48）。这些结果表明，TIL+PD-L1+肿瘤是导致ICIs的主要原因，它含有大量的浸润性细胞亚群。
三、总结与思考
综上所述，研究者们根据TIL和PD-L1状态将乳腺肿瘤分为四组，发现22%的肿瘤被归类为TIL+PD-L1+肿瘤（69%为TN型），而66%的肿瘤被归类为TIL?PD-L1?肿瘤（77%为HR+HER2?型）。此外，研究者们还发现，在TIL+PD-L1+肿瘤中，CD+巨噬细胞和FOXP3+treg大量积聚，这可能与免疫治疗的抵抗有关。目前的结果表明，评估TILs、PD-L1表达和TAMs有助于根据BC的免疫微环境有效地选择候选的免疫疗法和开发新的策略。
图片/网络（侵删）
策划/殷佩浩
审校/殷佩浩
责任编辑/朱锐秋
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