酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)
产品货号：R
产品包装：2×50ml
产品简介：
酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+，酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn离子为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。临床上，该染色法对前列腺癌和其他脏器的转移性前列腺癌呈强阳性反应，霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing肉瘤、成骨肉瘤等呈阴性反应。
产品组成：
自备材料：
1.蒸馏水
2.恒温箱
3.封片剂
操作步骤(仅供参考)：
(一)冰冻切片染色
冰冻切片至蒸馏水。
1.切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染15～60min。
2.入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。
3.在上述过程中配制ACP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ACP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1～2min。
4.流水冲洗3～5min，蒸馏水洗。
5.(可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。
(二)石蜡切片染色
石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
1.切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染4～12h，可以延长至24h。
2.入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。
3.在上述过程中配制ACP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ACP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1～2min。
4.流水冲洗3～5min，蒸馏水洗。
5.(可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗。
6.石蜡切片脱水，常规透明，中性树胶封片。
染色结果：
酶活性部位黑色硫化钴沉淀
细胞核根据复染液不同而不同
阴性对照(可选)：
将切片置入试剂(C)--ACP对照液中，室温1～2h孵育，其余步骤相同，结果为阴性。
注意事项：
1.ACP孵育液、ACP硫化液易失效，最好分成小分储存。ACP硫化液具有腐蚀性。
2.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3.样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4.组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
5.组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
6.不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
保存条件：
2-8℃避光，6个月有效。-20℃，12个月有效。