肿瘤浸润淋巴细胞是从肿瘤组织中分离出的浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocyte,TIL)。因为TIL本身具有肿瘤特异性,因此,很多学者认为,并也临床印证了,TIL经体外大规模扩增后回输具有很好的治疗的效果。
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肿瘤浸润淋巴细胞分离试剂盒对客户实行赠送使用,欢迎客户申请。
肿瘤浸润淋巴细胞体外增殖培养及杀伤活性测定
免疫细胞培养基(产品货号:ANDL-TBD-G)1L/瓶,2-8℃避光保存。
IL-2(终使用浓度为U/ml)
CD3
1.体外分离获得肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocytes,TIL)。
2.活化阶段:用培养液调节成1*/ml接种于孔板中,加入IL-2(U/ml),在37℃,5%CO2条件下培养。
注:一般培养的初期(7天左右)细胞无明显生长,为生长抑制期。由于肿瘤本身固有的生物学特性、肿瘤抗原性及淋巴细胞浸润程度等,体外增殖前期会受到不同程度的抑制;前期需尽快去除肿瘤细胞,如重量沉降法及贴壁去除法等,需具体情况具体分析。(前期处理有学者采用PHA、胰岛素、胰高血糖素等不同方法刺激)
3.增殖阶段:细胞增殖到后,用CD3单抗(30ng/mL)、CD28(30ng/mL),加入经Gy辐射的健康供者PBMC(1*)的培养瓶中,刺激第二天,加入IL-2(U/ml)快速扩增。
4.细胞经4-6周增殖,TIL可增殖至以上甚至达到。
5.MGG染色法提示,培养液中肿瘤细胞5天左右开始死亡,2周基本全部消失。
1.培养后的TILCD3+达到90%以上,CD4+、CD8+比例也不同程度增加。
2.淋巴瘤患者:三位患者平均回输量6.3*,回输后1位患者肿瘤完全消失,两位患者肿瘤部分缩小。
以TIL细胞为效应细胞,肿瘤细胞为靶细胞,两者按10:1混合。
TIL的体外杀伤活力2周后开始明显增加,4-5周时杀伤力最强。
检测CD3、CD4、CD8。
经过体外培养,TIL的CD3+可由60%增至90%以上,CD4+、CD8+也不同程度增加。
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